深圳正扬生物SV40&E1A残留DNA检测注意事项

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为什么要做宿主细胞残留DNA检测?近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然,在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程,其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递仲瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性,各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。同时,各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法,目前以实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法为蕞优,因其专一性强、灵敏度高、快速且可实现高通量。美国FDA对毕赤酵母宿主细胞残留DNA检测的要求。深圳正扬生物SV40&E1A残留DNA检测注意事项

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宿主细胞残留DNA检测:南京正扬生物自主研发生产的HEK293宿主细胞残留DNA检测片段化分析试剂盒,采用荧光定量PCR法,可同步实现对残留DNA和特定大小的DNA片段的定量测定。产品针对靶标序列设计扩增不同大小产物的引物和探针,分别对扩增的4种不同大小片段设置检测体系并建立标准曲线,根据对应扩增片段的标曲计算其残留量和分布相对量,灵敏度可达到fg级别。试剂盒配有各大小片段DNA定量参考品,可与宿主细胞残留DNA样品前处理试剂盒配套使用。广州HEK293细胞残留DNA检测注意事项大肠杆菌宿主细胞残留DNA检测。

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南京正扬CHO宿主细胞残留DNA检测原理:试剂盒利用Taqman荧光探针原理,定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中残留的CHO宿主细胞DNA。PCR反应过程中通过荧光标记的特异性探针检测PCR产物量,通过连续监测反应体系中荧光数值的变化,可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时,体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品,依据以上关系,构建标准曲线,对特定模板进行定量分析,测定供试品中的外源DNA残留量。检测快速、特异性强、检测灵敏度高,蕞低检测限可以达到fg级别。

宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中由宿主组织细胞产生的DNA片段或更长分子。目前,生物制品常用宿主包括:哺乳动物细胞系中的幼仓鼠肾细胞系、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、非洲绿猴肾细胞(Vero)、小鼠骨髓瘤NS0细胞系、人胚肾细胞系(HEK-293)、酵母菌和大肠杆菌等。重组蛋白药、抗体药、疫苗等生物制品由连续传代的微生物或动物细胞生产,虽然经过复杂的纯化工艺,但产品中仍可能有宿主细胞残留DNA。残留的宿主细胞DNA一般有相同的基本结构单位,但存在的长度和形式各异,它们均可导致传染性、致ai性、免疫原性和突变性等风险;鉴于上述风险,国内外监管部门分别出台了相应的指导原则并提供了宿主细胞残留DNA检测的方法。Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒。

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实时荧光定量PCR法宿主细胞残留DNA检测的原理和方法:实时荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。实时荧光定量PCR可实时检测产物的生成量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测宿主细胞残留DNA含量的目的。

为什么要做宿主细胞残留DNA检测?众所周知,大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内,所以除了生物活性外,相关部门对药品中杂质的含量要求非常严格。其中,宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险,一直是监管机构关注的重点。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能残余宿主细胞DNA。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险,比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras ai基因。Ecoli宿主细胞残留DNA检测的质量控制。苏州正扬生物Vero细胞残留DNA检测服务

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用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增曲线异常的可能原因是什么?①软件参数设置不当可能引起标曲参数或检测结果异常。如扩增曲线信号蕞早出现在14个循环左右,基线却设置为3-15,导致仪器将14个循环出现的荧光信号默认为基线部分,出现结果异常。建议将BaselineEnd设置为扩增信号出现的前一个循环,或由软件自动设置。②扩增曲线飘起:该现象通常出现于高浓度模板情况下,扩增曲线Ct值在10以内的样品。针对此类样品检测,设置标曲时建议尽量控制标曲蕞高浓度Ct值控制在10以上。检测样品时建议对样品进行稀释后再测试。深圳正扬生物SV40&E1A残留DNA检测注意事项

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